解决方案
技术决定品质、品质决定品牌，服务创造价值
论坛精文|少弱畸形精子症患者细胞质内注射与细胞质内形态选择注射的比较
又到每周读精彩文章的时间啦本周捕精论坛带大家读的文章主题是↓↓↓
『少弱畸形精子症患者细胞质内注射与细胞质内形态选择注射的比较』
01介绍
ICSI自1992年引入以来，一直是人工生殖技术周期中克服严重男性不育的一种普通受精方法。注射的精子通常是随机选择的，在ICSI技术中，胚胎学家只根据精子的形态特征和运动能力来进行挑选。然而，许多研究报告指出，精子中存在的各种缺陷与受精率和怀孕率的降低有关，并与流产的风险增加有关。
在ICSI技术中，精子选择通常是在大约200×或400×的光学放大镜下进行的。然而，常规显微镜使用的低倍率导致在识别精子器官畸形方面受到限制，特别是精子头部的空泡，其中主要的缺陷，如精子头部大小比例异常和中段异常被观察到。评估精子核的正常形态应使用高放大倍数和分辨率准确进行。Bartoov等人开发了一种新的方法，被称为微型精子细胞形态学检查（MSOME），它评估精子的实时运动。他们通过结合MSOME和微操纵技术，使获得具有正常细胞核的完美精子成为可能。这个过程被称为改良的IVF过程，或胞浆内形态选择精子注射（IMSI），因为使用MSOME进行ICSI时，只选择一个移动的精子。
自2011年2月起，我们对因少弱畸形精子症（OAT）而接受ICSI治疗的患者采用了IMSI手术。本前瞻性研究的目的是通过比较以往ICSI周期的结果，评估IMSI程序在治疗男性因素患者，特别是OAT患者方面的临床优势。
02方法
2.1患者和设计
2010年5月至2012年6月，在首尔玛丽亚生育医院进行了66个周期的OAT不孕症的ICSI治疗。患者在2011年12月至2012年10月之间提供了IMSI的知情同意，该研究得到了玛利亚生育医院机构审查委员会的批准。
2.2精液评价和制备
对OAT的分析，根据世界卫生组织（2010）的标准进行确认：精子浓度<15 106/mL，活力<40%，严格的形态学<4%。精液通过密度梯度离心制备（Sperm Filter, Cryos, Aarhus, Denmark），使用MOPSE/MRC（Biosupply, Seoul, Korea），辅以10%的血清替代补充剂（Irvine Scientific, Irvine, CA, USA）。
2.3卵巢刺激和卵母细胞取回
女性患者使用GnRH激动剂(Superfact, Sanofi-Aventis, Frankfurt, Germany)治疗，使用长期方案或GnRH拮抗剂方案和重组FSH (Gonal F, Merk Serono, Darmstadt, Ger- many)。当两个或两个以上的卵泡直径达到18毫米时，给予10000 IU的hCG (Ovidrel, Merk Serono)。注射hCG 36小时后取卵。
2.4传统的ICSI
用含有0.1%透明质酸酶（Biosupply）的MRC#ICSI（Biosupply）去除附着在卵子上的积聚细胞后，将收集的卵子在IVF受精介质（Cook, Brisbane, Australia）中培养。使用配备有Narishige操纵器（Narishige, Tokyo, Japan）的倒置尼康显微镜（TE 2000 U, Nikon, Kawasaki, Japan）进行ICSI。在200×至400×放大镜下进行精子选择（图1），并在200×放大镜下将外观正常的精子注入卵母细胞。
2.5IMSI
所有运动精子在高倍显微镜(6600 ×)下进行分析(图2)，显微镜(TE 2000 U, Nikon)结合60 ×空气物镜，调制对比度照明(RI IMSI, RI, Cornwall, UK)。这些图像是使用DC2 IMSI相机(Nikon)和符合DICOM标准的医疗成像监视器(EIZO, Ishika- wa, Japan)拍摄的。精子选择是在PVP滴剂中进行的(Irvine Scientific)，滴剂上覆盖无菌矿物油(biosupply - ply)。正常精子形态为光滑、对称、卵形，平均长度和宽度限制分别为(4.75±0.28µm和3.28±0.20µm)，核染色质均匀，无区域核紊乱。包含不超过一个边缘的小液泡di - ameter 0.78±0.18µm 。
图1所示：在200 ×至400 ×放大倍数下选择的精子。(a) 200 ×， (b) 400 ×。
图2 放大6600倍的精子。(A)正常的精子 (B)有大液泡的正常精子(箭头所指)
(C)带小液泡的正常精子(箭头所指) (D)具有多个液泡的正常精子(箭头所指)
2.6胚胎培养和转移
受精后16 ~ 18小时，观察两个不同的原核和两个极体的出现。zy- gotes在体外受精卵裂培养基(Cook)中培养，37℃，6% CO2, 5% O2和89% N2。取卵3天后，胚胎被转移。
2.7确认怀孕
如果采卵后14天血液中的β-hCG浓度呈阳性，一周后的追踪测试显示持续上升，如果在怀孕6至7周时进行的阴道超声检查结果显示有孕囊，则验证为临床怀孕。植入率由植入的胚胎数量与植入子宫的胚胎囊数量的比值显示。流产被定义为在妊娠12周之前的胎儿损失，尽管在妊娠前三个月的超声检查中出现了孕囊。12周后根据胎儿的心脏活动来判断是否持续妊娠。
2.8统计分析
统计分析是用SPSS ver. 12.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)。学生t检验用于比较连续变量，而chi-squared检验用于离散变量。P值<0.05被认为是显著的。
03结论
本研究将共66个IMSI周期与之前的ICSI周期进行了比较。将以往的ICSI周期与IMSI周期的特征进行比较，在女性年龄、获得的卵母细胞或每个卵母细胞的成熟率方面没有显著差异(表1)。
表1 研究小组的特点
然而，与之前的ICSI周期相比，IMSI中提前进行IVF-ET手术的次数有统计学意义(2.02±1.53 vs. 1.11±1.39,p <0.05)(表1)。
两组临床结果比较见表2。两组在受精率、第3天优质胚率和移植胚率方面均无显著差异。然而，IMSI组的临床妊娠率和植入率显著高于以往的ICSI周期(33.3%和14.6%比12.5%和5.4%，p <0.05)。持续妊娠率也有显著差异(27.3%对6.3%，p <0.05)。两组孕妇的流产率(18.2% vs. 37.5%)差异无统计学意义。
表2 每种注射方法的实验室和临床结果的比较
Mauri等人得出结论，IMSI不能改善第2天的胚胎质量。许多研究发现，在受精方面，高倍精子选择和早期胚胎发育以及在第3天和第5天获得高质量胚胎的比率之间没有相关性。同样，Vanderzwalmen et al.在同胞卵母细胞研究中发现，在ICSI前进行高倍放大的精子选择与传统的ICSI相比，在受精方面没有显著差异。IMSI对3天前胚质量无显著影响，但胚囊肿的形成和质量与不同等级的精子密切相关。卵母细胞注射精子没有空泡或≤2小空泡在头脑中产生显著更高的囊胚形成率(分别为56.3%和61.4%)比精子要么＜2小空泡或至少有一个大空泡,或一个大空泡和 头部形状异常或其他异常(分别为5.1%和0%)。
IMSI开始应用于多次植入失败的患者或显示出高DNA片段的患者。然而，最近发表的一项研究表明，IMSI技术的应用在高清晰度观察到高水平空泡的患者中产生了满意的结果。已知不同大小的液泡与精子DNA的完整性、精确变性和染色质包有非常密切的关系。
Garolla等人证实，有空泡的精子与精子DNA的完整性、破碎和染色体异常有关。Wilding等人研究表明，DNA片段化与形态异常的精子中的空泡有关。最近，Hammoud等人指出，大空泡或多空泡的存在与精子中DNA碎片的数量有关，比没有空泡的要高。在这些研究中，空泡可能与染色质凝结失败有关。
以往的报道表明，当用异常精子进行ICSI时，特别是注入的精子中出现空泡，与胚胎发育晚有关。胚胎发育缓慢，卵裂发育不良通常是由于精子DNA损伤或胚胎的非整倍体。
Knez等人观察到，IMSI改善了胚胎发育和精子显微注射的临床结果，在相同的男性不育夫妇和胚胎发育不良的ICSI尝试。我们的结果还表明，与之前的ICSI周期相比，IMSI改善了同对夫妇的临床妊娠(33.3% vs. 12.5%， p <0.05)、植入(14.6% vs. 5.4%， p <0.05)和持续妊娠率(27.3% vs. 6.3%， p <0.05)。
综上所述，在6600x高倍镜下进行的IMSI的优点是能够对头部有空泡或其他缺陷的精子进行分选，而传统的ICSI (200 ×−400 ×)无法观察到这些缺陷。临床IMSI是一种有效的IVF-ET技术，具有良好的临床效果，如比传统的ICSI更好的植入和妊娠率。
下一页